2024年01月03日，國(guó)家藥監(jiān)局在2024年第1號(hào)文件中一連發(fā)布了12項(xiàng)醫(yī)療器械注冊(cè)審評(píng)指導(dǎo)原則，本文為大家?guī)砥渲械囊黄词恰恫剪斒暇?IgM/IgG 抗體檢測(cè)試劑注冊(cè)審查指導(dǎo)原則（2024年第1號(hào)）》，一起看正文。
2024年01月03日，國(guó)家藥監(jiān)局在2024年第1號(hào)文件中一連發(fā)布了12項(xiàng)醫(yī)療器械注冊(cè)審評(píng)指導(dǎo)原則，本文為大家?guī)砥渲械囊黄词恰恫剪斒暇?IgM/IgG 抗體檢測(cè)試劑注冊(cè)審查指導(dǎo)原則（2024年第1號(hào)）》，一起看正文。
布魯氏菌IgM/IgG抗體檢測(cè)試劑注冊(cè)審查指導(dǎo)原則
本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)醫(yī)療器械注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)布魯氏菌 IgM/IgG抗體檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門審評(píng)注冊(cè)申報(bào)資料提供依據(jù)。
本指導(dǎo)原則是對(duì)布魯氏菌 IgM/IgG抗體檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。
本指導(dǎo)原則是對(duì)申請(qǐng)人和審評(píng)人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊(cè)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。
本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。
一、適用范圍
本指導(dǎo)原則適用于布魯氏菌 IgM/IgG抗體檢測(cè)試劑。是指基于抗原抗體反應(yīng)原理，采用免疫層析法、酶聯(lián)免疫法或化學(xué)發(fā)光法等檢測(cè)技術(shù)，對(duì)來源于血清、血漿或全血等人體樣本中的布魯氏菌IgM/IgG抗體進(jìn)行體外定性檢測(cè)的試劑。預(yù)期用途為布魯氏菌感染的輔助診斷。布魯氏菌的生物學(xué)特征，相關(guān)疾病的臨床適應(yīng)證背景以及相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室檢查方法等背景信息見附件。
本指導(dǎo)原則適用于布魯氏菌 IgM/IgG抗體檢測(cè)試劑注冊(cè)申請(qǐng)和變更申請(qǐng)的情形。本指導(dǎo)原則僅針對(duì)布魯氏菌 IgM/IgG抗體檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資料中的部分內(nèi)容進(jìn)行撰寫，其他未盡事宜應(yīng)當(dāng)符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國(guó)家藥品監(jiān)督管理局公告2021年第122號(hào)）等相關(guān)法規(guī)要求。
二、注冊(cè)審查要點(diǎn)
（一）監(jiān)管信息
1. 產(chǎn)品名稱及分類編碼
產(chǎn)品名稱應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)與備案管理辦法》及相關(guān)法規(guī)的要求。根據(jù)《體外診斷試劑分類規(guī)則》，該產(chǎn)品按照第三類體外診斷試劑管理，分類編碼為6840。
2. 其他信息還包括產(chǎn)品列表、關(guān)聯(lián)文件、申報(bào)前與監(jiān)管機(jī)構(gòu)的聯(lián)系情況和溝通記錄以及符合性聲明等文件。
（二）綜述資料
綜述資料主要包括概述、產(chǎn)品描述、預(yù)期用途、申報(bào)產(chǎn)品上市歷史及其他需說明的內(nèi)容。建議申請(qǐng)人對(duì)以下幾方面內(nèi)容進(jìn)行著重介紹：
1.臨床適應(yīng)證背景情況
描述布魯氏菌的生物學(xué)特征、流行病學(xué)特征、抗體的分布情況（濃度水平、產(chǎn)生和消失的時(shí)間等）、易感人群、感染后的臨床表現(xiàn)和相關(guān)疾病、現(xiàn)有的臨床診斷方法或其他實(shí)驗(yàn)室檢查方法等。
2.同類產(chǎn)品上市情況
從技術(shù)方法及預(yù)期用途等方面寫明申報(bào)產(chǎn)品與現(xiàn)行臨床診斷方法以及目前市場(chǎng)上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要異同點(diǎn)。
（三）非臨床資料
1.產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗(yàn)報(bào)告
1.1產(chǎn)品技術(shù)要求
注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、前期評(píng)價(jià)等結(jié)果，依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)資料，結(jié)合產(chǎn)品特性按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的要求編寫。該類產(chǎn)品作為第三類體外診斷試劑，應(yīng)當(dāng)以附錄形式明確主要原材料以及生產(chǎn)工藝要求。
如有適用的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，產(chǎn)品技術(shù)要求的相關(guān)要求應(yīng)不低于相應(yīng)的要求。
1.2產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告
布魯氏菌IgM/IgG抗體檢測(cè)試劑尚無國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品，技術(shù)要求中應(yīng)體現(xiàn)企業(yè)參考品的相關(guān)要求，并使用企業(yè)參考品對(duì)三批產(chǎn)品進(jìn)行檢驗(yàn)。
2. 分析性能研究
注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)采用在符合質(zhì)量管理體系的環(huán)境下生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行所有分析性能研究，提交具體研究方法、試驗(yàn)方案、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)分析等詳細(xì)資料。
如申報(bào)產(chǎn)品適用不同的機(jī)型，需要提交采用不同機(jī)型進(jìn)行性能評(píng)估的資料。如申報(bào)產(chǎn)品包含不同的包裝規(guī)格，需要對(duì)各包裝規(guī)格進(jìn)行分析或驗(yàn)證。
適用的不同樣本類型應(yīng)分別進(jìn)行分析性能研究。
分析性能評(píng)估所用樣本的基本信息均需明確，例如樣本來源、樣本類型、采集保存運(yùn)輸和處理方式、稀釋方式、定值過程及數(shù)據(jù)等。研究中采用的布魯氏菌IgM/IgG抗體陽性樣本，應(yīng)采用科學(xué)合理的方法確定其陰陽性和濃度水平，提交具體的試驗(yàn)資料。分析性能評(píng)估用樣本一般應(yīng)為真實(shí)樣本，如涉及稀釋后檢測(cè)，應(yīng)采用與適用樣本類型一致的陰性基質(zhì)。對(duì)于各項(xiàng)性能中采用的樣本，在下述各項(xiàng)性能研究資料中分別提供樣本信息列表。
2.1樣本穩(wěn)定性
樣本穩(wěn)定性研究應(yīng)采用臨床真實(shí)樣本進(jìn)行，通常應(yīng)當(dāng)至少包含一定數(shù)量陰性樣本及弱陽性樣本，考察樣本在經(jīng)歷不同的儲(chǔ)存條件后，試劑能否穩(wěn)定輸出符合要求的結(jié)果。樣本穩(wěn)定性可以包含樣本凍融穩(wěn)定性和運(yùn)輸穩(wěn)定性的研究。
2.2適用的樣本類型
描述適用的樣本類型，如：血清、血漿或全血等，血漿和全血需考察不同抗凝劑的適用性。
如產(chǎn)品適用于血清和血漿，可采用同源比對(duì)驗(yàn)證樣本的可比性。
如產(chǎn)品適用于全血，可采用該樣本類型進(jìn)行全性能評(píng)估，亦可至少進(jìn)行檢出限、不同區(qū)域樣本的包容性和精密度研究。
2.3校準(zhǔn)品的量值溯源和質(zhì)控品的賦值
描述校準(zhǔn)品的量值溯源（如適用）。
描述質(zhì)控品的賦值（如適用）。需至少采用三批產(chǎn)品分別在不同適用機(jī)型進(jìn)行賦值研究。
2.4精密度
應(yīng)對(duì)精密度指標(biāo)，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)等的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求。精密度研究應(yīng)采用臨床樣本。
應(yīng)考慮運(yùn)行、時(shí)間、操作者、儀器、試劑批次和地點(diǎn)等影響精密度的條件，設(shè)計(jì)合理的精密度試驗(yàn)方案進(jìn)行評(píng)價(jià)。
設(shè)定合理的精密度評(píng)價(jià)周期，例如：為期至少20天的檢測(cè)，具體方案可參考性能評(píng)價(jià)相關(guān)文件進(jìn)行。
用于精密度評(píng)價(jià)的臨床樣本應(yīng)至少包含3個(gè)水平：陰性樣本、臨界陽性樣本、（中或強(qiáng)）陽性樣本，并根據(jù)產(chǎn)品特性設(shè)定適當(dāng)?shù)木芏纫蟆?/p>
陰性樣本：待測(cè)物濃度低于檢出限或?yàn)榱銤舛龋幮詸z出率應(yīng)為100%（n≥20）。
臨界陽性樣本：待測(cè)物濃度略高于試劑盒的檢出限，陽性檢出率應(yīng)≥95%（n≥20）。
中陽性樣本：待測(cè)物濃度呈中等陽性，陽性檢出率為100%且CV≤15%（n≥20）。
強(qiáng)陽性樣本：待測(cè)物濃度呈強(qiáng)陽性，陽性檢出率為100%且CV≤15%（n≥20）。
2.5包容性
提供具有時(shí)間和區(qū)域特征性的不同來源的患者真實(shí)臨床樣本進(jìn)行驗(yàn)證，應(yīng)包括羊種、牛種、豬種布魯氏菌感染的情況。IgM抗體、IgG抗體檢測(cè)試劑分別研究，驗(yàn)證內(nèi)容應(yīng)包括檢出限、重復(fù)性等，提供樣本及濃度的確認(rèn)方法、試驗(yàn)數(shù)據(jù)。其中應(yīng)注意，包容性研究樣本和檢出限研究樣本不能重復(fù)。
2.6檢出限
檢出限的確定：建議選取特定滴度的特異性抗體陽性樣本梯度稀釋進(jìn)行檢出限確定，每個(gè)梯度的稀釋液重復(fù)3～5份，每份稀釋液重復(fù)檢測(cè)不少于20次，將具有95%陽性檢出率的抗體水平作為檢出限。
IgM抗體、IgG抗體檢測(cè)試劑應(yīng)分別選擇不同來源具有代表性的3個(gè)臨床樣本進(jìn)行檢出限的確定。
檢出限的驗(yàn)證：選擇具有時(shí)間和區(qū)域特征性的至少3個(gè)臨床樣本（與檢出限確定不同樣本）在檢出限濃度水平進(jìn)行驗(yàn)證，應(yīng)達(dá)到95%陽性檢出率。
采用的稀釋液應(yīng)與適用樣本類型的基質(zhì)一致，可采用陰性樣本進(jìn)行稀釋。抗體檢測(cè)試劑應(yīng)提供詳細(xì)的抗體類型和滴度的確認(rèn)方法及驗(yàn)證結(jié)果。
2.7分析特異性
2.7.1交叉反應(yīng)驗(yàn)證（IgM抗體、IgG抗體檢測(cè)試劑應(yīng)分別驗(yàn)證）
用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體種類主要考慮以下幾方面：抗原結(jié)構(gòu)具有同源性（如在分類學(xué)上的近緣菌）、易引起相同或相似的臨床癥狀（如胞內(nèi)感染菌）、易并發(fā)感染的其他微生物（見表1），以及低濃度病原體特異性IgG抗體與高濃度特異性IgM抗體以及高濃度病原體特異性IgG抗體與低濃度特異性IgM抗體的交叉反應(yīng)驗(yàn)證。
表1 用于交叉反應(yīng)研究的病原體抗體
傷寒沙門菌 | 副傷寒沙門菌 |
幽門螺桿菌 | 結(jié)核分枝桿菌 |
金黃色葡萄球菌 | 腸道病毒 |
肝炎病毒 | 大腸埃希菌 |
EB病毒 |
|
提供所有用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體抗體陽性樣本的來源、和濃度/滴度確認(rèn)等詳細(xì)的試驗(yàn)資料。
驗(yàn)證不少于30份在布魯氏菌病高發(fā)地區(qū)的正常健康人樣本。
2.7.2內(nèi)源/外源物質(zhì)干擾
不同樣本類型其潛在干擾物質(zhì)可能不同，應(yīng)根據(jù)具體采集的樣本類型，選擇適用的干擾物質(zhì)進(jìn)行研究（見表2）。建議申請(qǐng)人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）條件下進(jìn)行評(píng)價(jià)，在抗體臨界陽性水平進(jìn)行干擾試驗(yàn)驗(yàn)證。
表2 用于干擾試驗(yàn)的物質(zhì)
物質(zhì) | 活性成分 |
血液中干擾物質(zhì) | 膽紅素、血脂、血紅蛋白、類風(fēng)濕因子、抗核抗體、抗線粒體抗體、異嗜性抗體（如HAMA）、球蛋白、總IgG、總IgM、紅細(xì)胞壓積（全血樣本適用）等。 |
常見治療藥物 | 多西環(huán)素、利福平、慶大霉素、氟喹諾酮類、甲氧芐啶 / 磺胺甲唑、β-內(nèi)酰胺類、風(fēng)濕治療藥物、對(duì)乙酰氨基酚類 |
2.8 高劑量鉤狀效應(yīng)
申請(qǐng)人應(yīng)評(píng)估高劑量鉤狀效應(yīng)并提交研究資料。
2.9 IgM抗體破壞試驗(yàn)（IgM抗體檢測(cè)試劑適用）
對(duì)至少5份含有病原體特異性IgM抗體的樣本進(jìn)行IgM破壞試驗(yàn)研究，方法為采用特定的化學(xué)制劑（如2－巰基乙醇或二硫蘇糖醇）處理樣本后，重新進(jìn)行檢測(cè)，IgM檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陰性。
2.10企業(yè)參考品性能
根據(jù)主要原材料研究資料中的企業(yè)參考品設(shè)置情況，采用三批產(chǎn)品對(duì)企業(yè)參考品進(jìn)行檢驗(yàn)并提供詳細(xì)的試驗(yàn)數(shù)據(jù)。
2.11反應(yīng)體系研究
2.11.1研究樣本采集時(shí)間點(diǎn)的選擇：是否受病程、臨床癥狀等因素的影響。
2.11.2反應(yīng)條件確定
申請(qǐng)人應(yīng)考慮反應(yīng)時(shí)間、判讀時(shí)間、反應(yīng)溫度/濕度、洗滌液體積和洗滌次數(shù)（如涉及）等條件對(duì)產(chǎn)品性能的影響，通過試驗(yàn)確定上述條件的最佳組合。
2.11.3反應(yīng)體系中樣品加樣方式及加樣量確定：通過試驗(yàn)確定最佳的加樣方式及加樣量。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進(jìn)行處理后方可用于最終檢測(cè)，申請(qǐng)人還應(yīng)對(duì)樣本稀釋液及其用量、其他必要的處理方法等進(jìn)行研究。對(duì)于IgM抗體檢測(cè)試劑，如采用間接法，建議考慮高濃度特異性IgG對(duì)結(jié)果的影響，合理設(shè)置IgG去除相關(guān)樣本處理步驟，以降低特異性IgG可能造成的假陰性和假陽性。
3.穩(wěn)定性研究
一般應(yīng)包含研究方案，采用的樣本、儀器和試劑信息，數(shù)據(jù)（如檢驗(yàn)結(jié)果、溫度記錄等）及試驗(yàn)結(jié)果等。
3.1實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（貨架有效期）
提交至少三批申報(bào)產(chǎn)品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究資料。明確儲(chǔ)存的環(huán)境條件（如溫度、濕度和光照）及有效期。
3.2使用穩(wěn)定性
提交申報(bào)產(chǎn)品實(shí)際使用期間穩(wěn)定性的研究資料，應(yīng)包括所有組成成分的開封穩(wěn)定性。適用時(shí)提交復(fù)溶穩(wěn)定性、機(jī)載穩(wěn)定性及凍融次數(shù)研究資料等。如涉及校準(zhǔn)品，還應(yīng)提交校準(zhǔn)頻率或校準(zhǔn)穩(wěn)定性研究資料。明確產(chǎn)品使用的溫度、濕度條件等。
3.3運(yùn)輸穩(wěn)定性
提交申報(bào)產(chǎn)品可在特定或者預(yù)期的條件下運(yùn)輸?shù)难芯抠Y料，應(yīng)說明產(chǎn)品正確運(yùn)輸?shù)沫h(huán)境條件（如溫度、濕度、光照和機(jī)械保護(hù)等）。同時(shí)說明產(chǎn)品的包裝方式以及暴露的最差運(yùn)輸條件。注意應(yīng)考察經(jīng)過運(yùn)輸條件后實(shí)時(shí)穩(wěn)定性。
4.陽性判斷值研究
提交對(duì)申報(bào)試劑陰性/灰區(qū)/陽性等結(jié)果判斷的陽性判斷值（cut-off，CO）確定的研究資料，包括具體的試驗(yàn)方案、人群樣本選擇、評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和研究數(shù)據(jù)等。確定陽性判斷值使用的樣本來源的選擇應(yīng)考慮如下因素的影響：
4.1不同地理區(qū)域流行病學(xué)背景的差異：高危人群（包括牧區(qū)和相關(guān)職業(yè)）和普通人群。
4.2患者處于不同的感染階段：急性期、亞急性期和慢性期，首次感染與復(fù)發(fā)感染。
申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)具體情況選擇適當(dāng)?shù)姆椒ǎ缡茉囌吖ぷ魈卣髑€（ROC）的分析方式，來確定合理的陽性判斷值。若試驗(yàn)結(jié)果存在灰區(qū)，則應(yīng)明確灰區(qū)建立的基礎(chǔ)。應(yīng)重點(diǎn)考察對(duì)弱陽性樣本的區(qū)分能力，研究中應(yīng)包含有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的弱陽性樣本例數(shù)。
提交陽性判斷值所用樣本信息列表，至少包括性別、年齡、動(dòng)物或其制品接觸史（如適用）、發(fā)病天數(shù)（如適用）、臨床診斷信息、樣本來源機(jī)構(gòu)、抗體檢測(cè)結(jié)果等。陽性判斷值研究用樣本不應(yīng)與臨床試驗(yàn)樣本重復(fù)。
如果產(chǎn)品適用不同樣本類型，需要對(duì)所有樣本類型進(jìn)行陽性判斷值的驗(yàn)證。
5.其他資料
5.1主要原材料研究資料
5.1.1布魯氏菌抗體檢測(cè)試劑所用特異性抗原
病原體特異的抗原是該類產(chǎn)品的關(guān)鍵原材料。在選擇抗原原料時(shí)，應(yīng)注重抗原表位的選擇，避免菌種間差異造成的假陰性，亦應(yīng)考慮抗原在其他近緣菌的表達(dá)情況，避免存在交叉反應(yīng)出現(xiàn)假陽性。原材料研究資料中應(yīng)詳述該方面的考慮。
首先應(yīng)詳述抗原表位及選擇依據(jù)，此外應(yīng)提交抗原來源、制備、篩選、純化、鑒定及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（外觀、蛋白濃度、純度、分子量、功能性試驗(yàn)等）詳細(xì)試驗(yàn)資料。
主要包括以下兩種情況：
5.1.1.1企業(yè)自制抗原
如為天然抗原，則應(yīng)對(duì)毒株選擇、培養(yǎng)、抗原提取、純化、鑒定等試驗(yàn)過程予以詳述。如為重組抗原，則應(yīng)提交有關(guān)特定基因選擇、序列信息、克隆構(gòu)建及轉(zhuǎn)化、抗原表達(dá)及純化、鑒定等詳細(xì)資料，重組抗原應(yīng)明確與天然抗原結(jié)構(gòu)的異同。
5.1.1. 2企業(yè)外購抗原
應(yīng)詳述抗原的名稱、抗原生物學(xué)來源、供應(yīng)商名稱、提交供應(yīng)商選擇的研究資料及供應(yīng)商出具的抗原性能指標(biāo)及檢驗(yàn)報(bào)告。重組抗原應(yīng)描述關(guān)特定基因選擇、序列信息，克隆構(gòu)建及轉(zhuǎn)化，抗原表達(dá)及純化、鑒定等資料，重組抗原應(yīng)明確與天然抗原結(jié)構(gòu)的異同。
5.1.2其他主要原材料
除上述主要原材料外，產(chǎn)品中包含的其他主要原材料，如小鼠抗人IgM/IgG單克隆抗體、酶標(biāo)抗體、膠體金、硝酸纖維素膜、微孔板、樣本稀釋液等，均應(yīng)進(jìn)行選擇及驗(yàn)證，并提交相關(guān)資料。明確主要原材料的供應(yīng)商和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。免疫層析方法學(xué)的產(chǎn)品如適用于全血，應(yīng)介紹血細(xì)胞去除方式，并驗(yàn)證去除效果。
5.1.3試劑盒質(zhì)控品/質(zhì)控線
產(chǎn)品應(yīng)設(shè)置合理的質(zhì)控品/質(zhì)控線。質(zhì)控品應(yīng)至少包含陰性和陽性兩個(gè)水平。抗體檢測(cè)試劑陽性質(zhì)控品可選擇臨床陽性樣本，陰性質(zhì)控品可選擇臨床陰性樣本或陰性基質(zhì)等。提交相關(guān)原料的來源、選擇和性能確認(rèn)等相關(guān)研究資料，明確供應(yīng)商和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。企業(yè)應(yīng)對(duì)質(zhì)控品的檢測(cè)結(jié)果（如A值）做出明確的范圍要求（試驗(yàn)有效性的判斷）。
5.1.4企業(yè)參考品
該類產(chǎn)品的企業(yè)參考品一般包括陽性參考品、陰性參考品、檢出限參考品和重復(fù)性參考品。應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品性能驗(yàn)證的實(shí)際需要設(shè)置企業(yè)參考品。
應(yīng)提交企業(yè)參考品的原料來源、選擇、制備、陰陽性及濃度/滴度確認(rèn)方法或試劑等相關(guān)驗(yàn)證資料。企業(yè)參考品的基質(zhì)應(yīng)與待測(cè)樣本相同。布魯氏菌抗體檢測(cè)試劑的企業(yè)參考品的設(shè)置建議如下：
5.1.4.1陽性參考品
陽性參考品應(yīng)考慮覆蓋不同來源及特征的布魯氏菌抗體陽性樣本，可選擇至少各5份確認(rèn)為陽性的臨床樣本，并設(shè)置不同滴度水平；其中應(yīng)包含IgM/IgG單獨(dú)陽性和雙陽性的樣本。
5.1.4.2陰性參考品
陰性參考品應(yīng)考慮檢測(cè)特異性的評(píng)價(jià)，應(yīng)納入類風(fēng)濕因子陽性樣本及其他病原體特異性抗體陽性樣本。
5.1.4.3檢出限參考品
可設(shè)置臨床陽性樣本的系列稀釋樣本，其中應(yīng)包含檢出限水平, IgM和IgG分別設(shè)置。
5.1.4.4重復(fù)性參考品
建議包括高、低兩個(gè)濃度的臨床樣本，其中一個(gè)濃度應(yīng)為檢出限附近的濃度。
5.2生產(chǎn)工藝研究資料
5.2.1產(chǎn)品基本反應(yīng)原理介紹。
5.2.2生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并提交研究資料說明每一步驟生產(chǎn)工藝的研究確定資料。
5.2.3包被/標(biāo)記工藝研究，申請(qǐng)人應(yīng)考慮如包被/標(biāo)記液量、濃度、時(shí)間、條件等指標(biāo)對(duì)產(chǎn)品性能的影響，通過試驗(yàn)確定上述指標(biāo)的最佳組合。
5.2.4顯色系統(tǒng)、酶作用底物等的介紹以及最適條件研究。
（四）臨床評(píng)價(jià)資料
臨床試驗(yàn)的開展、方案的制定以及報(bào)告的撰寫等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，如相關(guān)法規(guī)、文件有更新，臨床試驗(yàn)應(yīng)符合更新后的要求。
1.臨床研究單位的選擇
應(yīng)選擇不少于3家（含3家）經(jīng)醫(yī)療器械臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)備案的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)，按照相關(guān)法規(guī)、指導(dǎo)原則的要求開展臨床試驗(yàn)。臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的選擇應(yīng)充分考慮擬申報(bào)產(chǎn)品的特點(diǎn)和預(yù)期用途，綜合流行病學(xué)背景，建議選擇不同地區(qū)的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開展臨床試驗(yàn)，使臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)和受試者的選擇具有一定的地域代表性。且臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)具有免疫學(xué)方法和微生物培養(yǎng)檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)，實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)有足夠的時(shí)間熟悉檢測(cè)系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)，熟悉臨床試驗(yàn)方案。
2.臨床試驗(yàn)方法
2.1如有已上市同類產(chǎn)品的，建議申請(qǐng)人選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市的同類產(chǎn)品作為對(duì)比試劑，采用試驗(yàn)體外診斷試劑與之進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)研究，評(píng)價(jià)申報(bào)產(chǎn)品的臨床性能。對(duì)比試劑的選擇應(yīng)從預(yù)期用途、樣本要求、檢測(cè)性能等方面，確認(rèn)其與申報(bào)產(chǎn)品具有較好的可比性。
如無已上市同類產(chǎn)品，申請(qǐng)人可選擇臨床參考標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較研究。臨床參考標(biāo)準(zhǔn)即按照國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)發(fā)布的《布魯氏菌病診斷 WS 269-2019》等文件進(jìn)行病例診斷的方法。
2.2 針對(duì)IgM檢測(cè)，還應(yīng)進(jìn)行一定量的新鮮樣本與布魯氏菌培養(yǎng)鑒定方法進(jìn)行比較，培養(yǎng)鑒定的方法應(yīng)參照按照國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)發(fā)布的《布魯氏菌病診斷 WS 269-2019》，培養(yǎng)時(shí)間建議不少于14天。對(duì)于培養(yǎng)陽性而IgM檢測(cè)陰性的病例應(yīng)進(jìn)一步隨訪其IgM的檢測(cè)情況，并結(jié)合IgG的檢測(cè)結(jié)果等綜合進(jìn)行分析。對(duì)于培養(yǎng)陰性而IgM檢測(cè)陽性的病例建議進(jìn)一步確認(rèn)病例的感染狀態(tài)。針對(duì)不一致的樣本，應(yīng)綜合以上因素進(jìn)行分析。
2.3 對(duì)于無已上市同類產(chǎn)品的試劑，為了進(jìn)一步充分評(píng)價(jià)申報(bào)產(chǎn)品的臨床檢測(cè)性能，申請(qǐng)人還應(yīng)納入至少10例患者的連續(xù)收集的樣本進(jìn)行研究，應(yīng)涵蓋不同的疾病階段，考察申報(bào)產(chǎn)品IgM和IgG的檢測(cè)性能，該部分病例應(yīng)包括一定數(shù)量的IgM、IgG陽轉(zhuǎn)的病例。
3.受試者選擇和樣本類型
3.1受試者選擇
入組人群應(yīng)以疑似病例為主，應(yīng)具有相應(yīng)的流行病學(xué)史以及相關(guān)的臨床癥狀及體征，如持續(xù)數(shù)日乃至數(shù)周發(fā)熱（包括低熱），多汗，乏力，肌肉和關(guān)節(jié)疼痛等，肝、脾、淋巴結(jié)腫大等。還應(yīng)包括各種可能的干擾樣本、交叉反應(yīng)樣本（其它病原體陽性）等。
應(yīng)注意，入組人群應(yīng)包括疾病的不同階段，急性期（3個(gè)月以內(nèi)）、亞急性期（3~6個(gè)月）、慢性期（超過6個(gè)月）。應(yīng)納入初次感染以及復(fù)發(fā)/再感染的病例。
3.2 樣本類型
布魯氏菌抗體檢測(cè)試劑適用的樣本類型一般包括血清、血漿、靜脈全血等。對(duì)于不同的樣本類型，如臨床前研究證實(shí)檢測(cè)性能沒有差異（如血清、血漿），則臨床試驗(yàn)中可匯總統(tǒng)計(jì)。
如產(chǎn)品適用的不同樣本類型差異較大（如：血清/血漿與靜脈全血），建議針對(duì)不同樣本類型進(jìn)行同源比對(duì)，亦可分別按照臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)與已上市同類產(chǎn)品或臨床參考標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比對(duì)。
4. 臨床試驗(yàn)樣本量
臨床試驗(yàn)樣本量應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，可采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行估算。根據(jù)相應(yīng)臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)，本臨床試驗(yàn)可依據(jù)申報(bào)產(chǎn)品相對(duì)于對(duì)比試劑的陰、陽性符合率分別估算最低陰、陽性樣本例數(shù)。
4.1與已上市同類產(chǎn)品作為對(duì)比試劑的比較研究中，臨床樣本量的估算建議采用單組目標(biāo)值法進(jìn)行計(jì)算，陰陽性符合率的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)（P0）建議不低于90%。
臨床試驗(yàn)總體樣本量確定時(shí)應(yīng)在上述陰、陽性樣本最低樣本量估算的基礎(chǔ)上，同時(shí)考慮其他可能造成受試者脫落的情況以及可能需要納入的干擾樣本、交叉反應(yīng)樣本等情況適當(dāng)增加入組樣本量。
4.2與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)的比較研究，建議參考與對(duì)比方法/試劑比較研究部分的樣本量估算方法，設(shè)定合理的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)。
4.3與布魯氏菌培養(yǎng)鑒定比較研究，應(yīng)入組一定數(shù)量的陽性及陰性病例，考察試驗(yàn)體外診斷試劑與布魯氏菌培養(yǎng)鑒定的一致性，納入的例數(shù)也應(yīng)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)估算，可采用抽樣精度的公式進(jìn)行樣本量估算。
4.4 如申報(bào)產(chǎn)品適用于不同樣本類型，臨床試驗(yàn)需進(jìn)行不同樣本類型（如血清/血漿與全血）的同源比對(duì)時(shí)，樣本例數(shù)應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，建議每種樣本類型的陽性和陰性樣本例數(shù)均不少于70例。
5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法對(duì)臨床試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，對(duì)于申報(bào)產(chǎn)品與對(duì)比試劑/臨床參考標(biāo)準(zhǔn)的一致性評(píng)價(jià)，常選擇交叉四格表形式總結(jié)兩種方法的結(jié)果，評(píng)價(jià)指標(biāo)一般包括陽性符合率/陰性符合率、靈敏度/特異度，Kappa值等，并計(jì)算相應(yīng)的95%置信區(qū)間。同時(shí)應(yīng)針對(duì)疾病的不同階段進(jìn)行亞組分析。
對(duì)于IgM和IgG聯(lián)檢的產(chǎn)品，應(yīng)分別針對(duì)IgM、IgG以及二者聯(lián)檢與對(duì)比試劑/臨床參考標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
臨床試驗(yàn)中不一致結(jié)果均應(yīng)結(jié)合患者的流行病學(xué)背景、臨床癥狀、患者的免疫狀態(tài)、疾病轉(zhuǎn)歸以及其他檢驗(yàn)結(jié)果等信息進(jìn)行充分的分析。
6.倫理學(xué)要求
臨床試驗(yàn)必須符合赫爾辛基宣言的倫理學(xué)準(zhǔn)則。研究者應(yīng)考慮臨床試驗(yàn)用樣本的獲得和試驗(yàn)結(jié)果對(duì)受試者的風(fēng)險(xiǎn)，提請(qǐng)倫理委員會(huì)審查，并獲得倫理委員會(huì)的同意。注冊(cè)申報(bào)時(shí)應(yīng)提交倫理委員會(huì)的審查意見。
7.臨床試驗(yàn)方案
臨床試驗(yàn)實(shí)施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計(jì)科學(xué)合理的臨床試驗(yàn)方案。各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)執(zhí)行統(tǒng)一的臨床試驗(yàn)方案，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過程中遵循預(yù)定的方案實(shí)施，不可隨意改動(dòng)。整個(gè)試驗(yàn)過程應(yīng)在臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申請(qǐng)人的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。
試驗(yàn)方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床試驗(yàn)都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗(yàn)操作過程中和判定試驗(yàn)結(jié)果時(shí)應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。
8.質(zhì)量控制
臨床試驗(yàn)開始前，建議進(jìn)行臨床試驗(yàn)的預(yù)試驗(yàn)，以熟悉并掌握相關(guān)試驗(yàn)方法的操作、儀器、技術(shù)性能等，最大限度控制試驗(yàn)誤差。整個(gè)試驗(yàn)過程都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及精密度。
9.臨床試驗(yàn)報(bào)告撰寫
臨床試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該對(duì)試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對(duì)整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法，最后得出臨床試驗(yàn)結(jié)論。臨床試驗(yàn)報(bào)告的撰寫參考《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》及《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)報(bào)告范本》的相關(guān)要求。
（五）產(chǎn)品說明書和標(biāo)簽樣稿
產(chǎn)品說明書格式應(yīng)滿足《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求。產(chǎn)品說明書中技術(shù)內(nèi)容應(yīng)與注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，應(yīng)以規(guī)范格式進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。說明書編寫應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注以下內(nèi)容：
1.【預(yù)期用途】
產(chǎn)品預(yù)期用途的描述應(yīng)符合現(xiàn)行的疾病防治指南，其臨床試驗(yàn)入組病例應(yīng)能夠覆蓋產(chǎn)品適用人群。建議產(chǎn)品預(yù)期用途包括如下內(nèi)容：
本產(chǎn)品用于體外定性檢測(cè)人血清/血漿/全血樣本中的布魯氏菌的IgM/IgG抗體。
用于布魯氏菌感染的輔助診斷。本試劑盒檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，建議結(jié)合患者臨床表現(xiàn)和其他實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果對(duì)病情進(jìn)行綜合分析。
2.【樣本要求】重點(diǎn)明確以下內(nèi)容：
2.1樣本采集：明確采集時(shí)間、采集順序、采集量等，是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響。說明采集方法及樣本類型，對(duì)于血漿、全血樣本，應(yīng)注明對(duì)抗凝劑的要求。
2.2干擾物的影響：明確常見干擾物對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果是否產(chǎn)生影響，明確可接受的最大干擾物濃度。
2.3樣本處理及保存：樣本處理方法、保存條件（如冷藏、冷凍等）及不同保存條件下的保存時(shí)限和運(yùn)輸條件等。冷藏、冷凍樣本檢測(cè)前是否需要恢復(fù)室溫，冷凍樣本的凍融次數(shù)限制等。
3.【檢驗(yàn)方法】
詳細(xì)說明試驗(yàn)操作的各個(gè)步驟：
3.1試驗(yàn)環(huán)境：實(shí)驗(yàn)室的溫度、濕度要求，檢測(cè)試劑及樣本的復(fù)溫要求等。
3.2試劑配制方法，試劑開封后使用方法等。
3.3高濃度樣本稀釋的方法。
3.4試驗(yàn)條件：操作步驟、溫度、時(shí)間、儀器波長(zhǎng)等。
3.5質(zhì)量控制：操作步驟，質(zhì)控結(jié)果的要求（試驗(yàn)有效性的判斷），質(zhì)控結(jié)果不符合要求的處理方式。
3.6對(duì)于膠體金法檢測(cè)試劑可以圖示形式顯示正確的檢驗(yàn)操作方法、程序等。特別注意應(yīng)強(qiáng)調(diào)操作溫度及濕度條件、讀取結(jié)果的時(shí)間范圍。
3.7特別說明檢驗(yàn)操作過程中的注意事項(xiàng)。
4.【陽性判斷值】（如適用）
明確陽性判斷值，簡(jiǎn)要描述陽性判斷值確定的試驗(yàn)方法。
5.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
結(jié)合質(zhì)控線/對(duì)照品/質(zhì)控品/校準(zhǔn)品以及樣本的檢測(cè)結(jié)果，對(duì)所有可能出現(xiàn)的結(jié)果組合及相應(yīng)的解釋進(jìn)行詳述。對(duì)于膠體金法檢測(cè)試劑可采用圖示形式描述結(jié)果判讀方法。如有灰區(qū)判定，詳細(xì)說明灰區(qū)樣本的處理方法。
6.【檢驗(yàn)方法的局限性】
綜合產(chǎn)品的預(yù)期用途、臨床背景、檢測(cè)方法及適用范圍等信息，對(duì)可能出現(xiàn)的局限性進(jìn)行相關(guān)說明，建議包括以下內(nèi)容：
6.1本產(chǎn)品檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，不應(yīng)作為臨床診治的唯一依據(jù)，對(duì)患者的臨床管理應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)、治療反應(yīng)及流行病學(xué)等信息綜合考慮。
6.2不合理的樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)、處理及不當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)操作和實(shí)驗(yàn)環(huán)境均有可能導(dǎo)致假陰性或假陽性結(jié)果。
6.3由于細(xì)菌感染到機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體需經(jīng)一定時(shí)間，抗體的滴度水平存在個(gè)體差異等，應(yīng)綜合考慮IgM抗體檢測(cè)結(jié)果、IgG抗體檢測(cè)結(jié)果、染疫的家畜及其制品接觸史、涉疫區(qū)史、臨床表現(xiàn)等進(jìn)行疾病診斷。
6.4評(píng)價(jià)血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果時(shí)需要結(jié)合患者的臨床病程、基礎(chǔ)狀況（免疫狀態(tài)）以及年齡等因素綜合考慮，如：免疫功能低下、缺陷或免疫功能受抑制的人群、產(chǎn)生抗體能力較低的嬰幼兒，可能不產(chǎn)生或產(chǎn)生低滴度的抗體，其血清學(xué)抗體檢測(cè)的參考價(jià)值有限，可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的醫(yī)學(xué)解釋。
6.5在近幾個(gè)月內(nèi)接受過輸血或其他血液制品治療的人群，對(duì)其陽性檢測(cè)結(jié)果的分析應(yīng)慎重。
6.6該產(chǎn)品為定性檢測(cè)產(chǎn)品，結(jié)果并不能準(zhǔn)確反映布魯氏菌IgM /IgG抗體的滴度。
6.7其他需要說明的局限性等。
7.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
簡(jiǎn)述以下性能指標(biāo)：
7.1企業(yè)參考品符合率。
7.2檢出限：簡(jiǎn)要介紹評(píng)價(jià)方法、所用樣本情況以及評(píng)價(jià)結(jié)果。
7.3對(duì)包容性的研究情況進(jìn)行總結(jié)。
7.4對(duì)精密度的研究情況進(jìn)行總結(jié)。
7.5分析特異性
7.5.1交叉反應(yīng)：詳述交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體種類，及有/無交叉反應(yīng)的濃度水平。
7.5.2干擾試驗(yàn)：說明驗(yàn)證的干擾物質(zhì)種類及有/無干擾反應(yīng)的濃度水平。
7.6臨床試驗(yàn)：簡(jiǎn)要介紹試驗(yàn)方法、受試者及樣本、試驗(yàn)結(jié)果和結(jié)論等。
8.【注意事項(xiàng)】
8.1本產(chǎn)品僅用于體外診斷。
8.2明確本試劑盒所采用的生物學(xué)來源的組分，雖經(jīng)滅活，但不能保證其不具有潛在傳染性，需要嚴(yán)格按照生物安全有關(guān)規(guī)定操作，遵循實(shí)驗(yàn)室操作的常規(guī)規(guī)定。所有樣品、洗滌液（如適用）和各種廢棄物均應(yīng)按污染物處理。
8.3試劑操作的注意事項(xiàng)，如是否需要平衡至室溫再使用，是否需要搖勻等。不同批號(hào)的試劑是否可以混用。
8.4有關(guān)實(shí)驗(yàn)操作、樣本保存及處理等其他注意事項(xiàng)。
三、參考文獻(xiàn)
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