單純皰疹病毒(Herpes simplex virus ,HSV)是最早發(fā)現(xiàn)的人類皰疹病毒,也是人類病毒性疾病中最常見的病毒。HSV感染導(dǎo)致的單純皰疹是一種常見的傳染性皮膚病。從體外診斷試劑注冊(cè)視角,一起來看看什么是HSV。
引言:?jiǎn)渭儼捳畈《荆℉erpes simplex virus ,HSV)是最早發(fā)現(xiàn)的人類皰疹病毒,也是人類病毒性疾病中最常見的病毒。HSV感染導(dǎo)致的單純皰疹是一種常見的傳染性皮膚病。從體外診斷試劑注冊(cè)視角,一起來看看什么是HSV。
一、單純皰疹病毒結(jié)構(gòu)
單純皰疹病毒(Herpes simplex virus ,HSV)是最早發(fā)現(xiàn)的人類皰疹病毒,也是人類病毒性疾病中最常見的病毒。HSV感染導(dǎo)致的單純皰疹是一種常見的傳染性皮膚病。
HSV屬于人類皰疹病毒科α 病毒亞科,為線性雙鏈DNA 病毒,有HSV-1和HSV-2兩種亞型。HSV病毒顆粒呈球形,由包膜,間層,核衣殼和核心構(gòu)成。包膜為類脂雙層膜,表面上有許多突起,含8種病毒糖蛋白(gB, gC, gD ,gE, gF, gG, gH, gI和gJ);核衣殼為162個(gè)殼粒組成的對(duì)稱的二十面體;核心為病毒DNA分子及DNA蛋白;在包膜及衣殼間為間層,包含病毒編碼蛋白質(zhì)和復(fù)制啟動(dòng)相關(guān)的酶,覆蓋在衣殼周圍。
二、單純皰疹病毒感染特征
HSV主要通過接觸感染,感染可表現(xiàn)為溶細(xì)胞裂解和潛伏感染,其在上皮細(xì)胞進(jìn)行裂解復(fù)制,在感覺神經(jīng)元中則進(jìn)入潛伏期,受到外界刺激時(shí),病毒重新激活引起臨床癥狀,潛伏病毒還可以通過激活的方式重新進(jìn)入復(fù)制周期(Lei, Wang et al. 2020),并回到外周組織導(dǎo)致感染復(fù)發(fā)。HSV-1主要引起面部及腰以上皮膚黏膜病變,主要潛伏在三叉神經(jīng)節(jié);HSV-2主要引起生殖器及腰以下皮膚粘膜病變,主要潛伏在骶神經(jīng)節(jié)。這兩種病毒引起的疾病并沒有絕對(duì)的界限,比如HSV-1可引起的生殖器皰疹,HSV-2也可引發(fā)口腔及周圍感染。
三、單純皰疹病毒核酸檢測(cè)產(chǎn)品批準(zhǔn)情況
臨床可根據(jù)典型的臨床表現(xiàn)進(jìn)行診斷,而非典型病例可以借助病毒分離培養(yǎng),抗體檢測(cè),抗原檢測(cè)和核酸檢測(cè)等手段。其中病毒分離培養(yǎng)被廣泛當(dāng)作是金標(biāo)準(zhǔn),但是由于細(xì)胞培養(yǎng)周期較長(zhǎng),程序較復(fù)雜,在臨床檢驗(yàn)工作中應(yīng)用受到限制;抗體檢測(cè)是臨床上常用來檢測(cè)HSV感染的手段,病原體特異性IgM抗體常提示早期感染,特異性IgG抗體在原發(fā)性感染和再次感染時(shí)都可檢出,且存在時(shí)間較長(zhǎng);抗原檢測(cè)操作簡(jiǎn)便,但是對(duì)于低滴度樣本的敏感性差;而采用熒光探針聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real-time PCR)或其他分子生物學(xué)方法核酸檢測(cè)技術(shù),檢測(cè)待檢標(biāo)本中的HSV DNA,是目前檢測(cè)速度最快且敏感性最高的方法,可以從少量的標(biāo)本中檢測(cè)有無HSV DNA存在。
目前我國(guó)境內(nèi)已批準(zhǔn)多家單純皰疹病毒1型和2型檢測(cè)試劑盒,均采用熒光探針PCR方法,檢測(cè)靶標(biāo)為HSV DNA,檢測(cè)樣本類型主要為男性尿道拭子,女性宮頸拭子, 皰疹液等。臨床試驗(yàn)主要通過與已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行對(duì)比研究,驗(yàn)證申報(bào)產(chǎn)品的臨床性能可以滿足相關(guān)要求,可用于單純皰疹病毒感染的輔助診斷。
FDA已批準(zhǔn)單純皰疹病毒1型和2型檢測(cè)試劑盒檢測(cè)靶標(biāo)為HSV DNA或mRNA,檢測(cè)樣本類型包括皮膚粘膜損傷,口腔部位損傷,生殖器損傷,腦脊液等。其中在2014年FDA批準(zhǔn)SIMPLEXA HSV 1&2 DIRECT用于懷疑中樞神經(jīng)系統(tǒng)HSV感染患者的腦脊液樣本的檢測(cè)。境外臨床試驗(yàn)主要通過與金標(biāo)準(zhǔn)病毒培養(yǎng)鑒定比較,或與測(cè)序比較,評(píng)價(jià)產(chǎn)品臨床性能,確認(rèn)產(chǎn)品是否可用于具有相關(guān)癥狀的患者。
四、對(duì)單純皰疹病毒核酸檢測(cè)產(chǎn)品的思考
對(duì)于產(chǎn)品適用人群的考慮:?jiǎn)渭儼捳畲蠖喑示植科つw黏膜的皰疹糜爛性損害,全身癥狀一般較輕,但初發(fā)性皰疹往往全身癥狀較為明顯,如發(fā)熱,乏力,淋巴結(jié)觸痛等,HSV在各年齡階層人群普遍易感,女性患病率比男性高,兒童營(yíng)養(yǎng)不良或各種原因引起的免疫力低下也容易受到感染。臨床試驗(yàn)應(yīng)納入具有相關(guān)臨床癥狀的人群,且入組人群應(yīng)有一定的代表性。
對(duì)于產(chǎn)品適用樣本類型的考慮:?jiǎn)渭儼捳畈《靖腥究砂l(fā)生在多個(gè)部位,如口腔皰疹,皮膚皰疹,眼皰疹,生殖器皰疹,皰疹性腦炎,全身散播性皰疹感染,新生兒皰疹等。其起始感染部位是由患者感染病毒的途徑?jīng)Q定,而不是病毒的固有屬性,因此患者感染部位具有多樣性和復(fù)雜性,樣本之間具有差異性,申請(qǐng)人應(yīng)在產(chǎn)品設(shè)計(jì)階段需將產(chǎn)品檢測(cè)的樣本類型納入考慮,設(shè)計(jì)科學(xué)合理的臨床試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。
對(duì)于產(chǎn)品對(duì)比方法的考慮:如有已上市體外診斷試劑注冊(cè)同類產(chǎn)品,應(yīng)考慮預(yù)期用途,檢測(cè)靶標(biāo),樣本類型,試劑性能等方面選擇合適的已上市同類產(chǎn)品作為對(duì)比試劑驗(yàn)證產(chǎn)品的臨床性能。對(duì)于不同樣本類型,如無已上市同類產(chǎn)品,可考慮使用病毒培養(yǎng)鑒定方法和測(cè)序方法作為對(duì)比方法,評(píng)價(jià)產(chǎn)品性能是否可以滿足臨床需求。